圓二色光譜儀的工作原理是:利用蛋白質(zhì)的圓二色性及不對稱分子對左右圓偏振光吸收的不同來進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。蛋白質(zhì)或多肽中主要的光活性基團(tuán)是肽鍵、芳香氨基酸殘基及二硫鍵等,當(dāng)平面圓偏振光的吸收不相同時,會產(chǎn)生吸收差值。由于這種吸收差的存在,造成了偏振光矢量的振幅差,圓偏振光變成了橢圓偏振光,即蛋白質(zhì)的圓二色性。通過圓二色譜掃描儀,可以在一定程度上分析蛋白質(zhì)、多肽樣品的二級結(jié)構(gòu)和高級結(jié)構(gòu)。
要測到準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)CD譜,要同時看一看吸收譜,吸收值最好在0.5-2.0之間,這是最主要的參照標(biāo)準(zhǔn),對濃度沒有必然的規(guī)定,常見的經(jīng)驗(yàn)值為濃度在0.1-1.0 mg/ml 之間, 也可以更低或更高。
技術(shù)指標(biāo)
圓二色譜分析的供試品,大多數(shù)情況下的蛋白質(zhì)和多肽。蛋白質(zhì)的精確濃度是計(jì)算樣品二級結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵,一般要求樣品濃度為0.2μg/μl,濃度過高,測試時信號不好,需稀釋,樣品純度要在90%以上,不要添加任何保護(hù)劑或其它物質(zhì),樣品中應(yīng)避免含有光吸收的雜質(zhì),緩沖劑和溶劑在配制溶液前最好做單獨(dú)的檢查,透明性極好的磷酸鹽可用作緩沖體系。
大連華洋分析儀器有限公司主營電化學(xué)工作站,微區(qū)掃描電化學(xué)工作站,多通道電化學(xué)工作站,作為較早將圓二色光譜技術(shù)引進(jìn)國內(nèi)的公司,華洋科儀始終以科學(xué),嚴(yán)謹(jǐn),專業(yè),領(lǐng)先的形象得到國內(nèi)外廠商以及客戶的大力支持與信賴
圓二色譜在遠(yuǎn)紫外區(qū)的掃描圖譜,反映的是蛋白質(zhì)肽鍵的排布信息,計(jì)算所得的是蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)比例,即α-螺旋、β-折疊、轉(zhuǎn)角和不規(guī)則卷曲的比例。
圓二色譜在近紫外區(qū)的掃描圖譜,反映的是蛋白質(zhì)側(cè)鏈生色基團(tuán)色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等殘基的排布信息和二硫鍵微環(huán)境的變化。