圓二色光譜具有安全便捷的優(yōu)點
圓二色光譜用于推斷非對稱分子的構(gòu)型和構(gòu)象的一種旋光光譜。光學(xué)活性物質(zhì)對組成平面偏振光的左旋和右旋圓偏振光的吸收系數(shù)(ε)是不相等的,εL≠εR,即具有圓二色性。如果以不同波長的平面偏振光的波長λ為橫坐標(biāo),以吸收系數(shù)之差Δε=εL-εR為縱坐標(biāo)作圖,得到的圖譜即是圓二色光譜,簡稱CD。
如果某手性化合物在紫外可見區(qū)域有吸收,就可以得到具有特征的圓二色光譜。由于εL≠εR,透射光不再是平面偏振光,而是橢圓偏振光,摩爾橢圓度[θ]與Δε的關(guān)系為:[θ]=3300Δε。圓二色譜也可以摩爾橢圓度為縱坐標(biāo),以波長為橫坐標(biāo)作圖。由于△ε有正值和負(fù)值之分,所以圓二色光譜也有呈峰的正性圓二色譜和呈谷的負(fù)性圓二色譜。在紫外可見光區(qū)域測定
圓二色光譜與旋光譜,其目的是推斷有機(jī)化合物的構(gòu)型和構(gòu)象。
樣品必須保持一定的純度不含光吸收的雜質(zhì),溶劑必須在測定波長沒有吸收干擾,樣品能完全溶解在溶劑中,形成均一透明的溶液。圓二色光譜緩沖液、溶劑要求與池子選擇,緩沖液和溶劑在配制溶液前要做單獨的檢查,看是否在測定波長范圍內(nèi)有吸收干擾,
看是否形成沉淀和膠狀;在蛋白質(zhì)測量中,經(jīng)常選擇透明性極好的磷酸鹽作為緩沖體系。
樣品不同,測定的圓二色光譜范圍不同,對池子大小的選擇和濃度的要求也不一樣。蛋白質(zhì)CD光譜測量一般在相對較稀的溶液中進(jìn)行。橢圓率和摩爾橢圓率都依賴于測量條件。因此,溫度、波長和樣品濃度總是應(yīng)該特別注明的。當(dāng)用壓片法或石蠟油研磨法進(jìn)行固體粉末樣品測試時,要盡可能地研磨獲得細(xì)小均勻的樣品顆粒。圓二色光譜采用石蠟油糊方法時,必須注意某些憎水有機(jī)化合物可能溶于石蠟油中,這時所得
圓二色光譜在某種意義上應(yīng)視為溶液CD光譜。
圓二色光譜采用壓片法測試固體CD時,在保證手性樣品的定性濃度達(dá)到CD光譜儀檢測要求的同時,片越薄越透明越好(但切忌破損)。在某些情況下,壓片法不適用于手性抗衡陰離子存在下的固體誘導(dǎo)CD光譜的測定。